Dong Yi là câu chuyện kể về cuộc đời một cô gái bình dân trở thành quốc mẫu Chosun. 

Ji Jin Hee trong vai vua Suk Jong: vị vua của triều đại Joseon, người có khả năng lãnh đạo oai phong lẫm liệt, nhưng lại là một con người có trái tim rất thanh khiết tràn đầy tình cảm

Han Hyo Joo trong vai Choi Suk Bin (Dong Yi): một cung nữ, người sau này sẽ trở thành ái thiếp của vua Suk Jong. Cô sinh hạ cho vua một cậu con trai, người sau này sẽ lên ngôi báu trở thành vua Joseon.

Bae Soo Bin trong vai Cha Chun Soo: một kiếm sĩ cự phách và lực lưỡng. Anh là người bạn từ thủa niên thiếu với anh trai của Dong Yi sau nhận lời bạn, chăm sóc em gái trước khi người anh qua đời. Và tất nhiên, anh đã chăm lo, yêu thương Dong Yi đến hết đời mình.

Park Ha Sun trong vai In Hyun: hoàng hậu của vua Suk Jong. Bà là một người nhân hậu, nhưng bị mất vị thế khi nhà vua sủng ái cung nữ Jang, dẫn tới mối bất hoà trong triều. Cuối cùng bà đã được sủng ái trở lại và Jang bị giáng bậc, nhưng về sau In Hyun bị chết một cách bí ẩn và bè phái của Jang bị cho là đã hạ độc. Bà là nguời đã chăm sóc cho Dong Yi khi cô mới vào cung và dần dà tin tưởng cô.

Lee So Yeon trong vai Jang Hee Bin (Jang Ok Jeong): Từ một nàng cung nữ non nớt, với nhan sắc kiều diễm và sự thông minh, Ok Jeong dần dần chiếm được tình cảm của vua Suk Jong, trở thành vương phi được sủng ái nhất với biệt danh Hee Bin. Bị mù quáng bởi lòng tham, nàng ta đã làm điên đảo triều chính, khiến hoàng hậu In Hyun bị phế vị và nhiều đại thần trong triều bị giết. Sau khi hạ sinh được 1 hoàng tử, Jang Hee Bin trở thành hoàng hậu của vua Suk Jong. Về sau, khi In Hyun được phục vị, nàng Jang luôn tìm mọi cách để hãm hại hoàng hậu và Dong Yi.